等度高效液相色譜儀是實驗室中應(yīng)用最為廣泛的基礎(chǔ)型分離分析儀器，其核心特征在于整個分析過程中流動相的組成比例、流速及洗脫強度保持恒定不變。與梯度洗脫不同，等度洗脫不隨時間改變?nèi)軇┡浔龋虼颂貏e適用于樣品組分相對簡單、保留時間差異不大或僅需進行常規(guī)定性定量分析的場合。該儀器通過高壓泵將配制好的單一混合流動相以恒定流速輸送至色譜柱，利用待測組分在固定相和流動相之間分配系數(shù)的微小差異，實現(xiàn)復(fù)雜混合物中各成分的高效分離。
等度高效液相色譜儀主要由高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)（色譜柱）、檢測系統(tǒng)及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)五大模塊構(gòu)成。其中，高壓泵確保流動相在高壓下穩(wěn)定輸出；自動進樣器或手動進樣閥將微量樣品精準注入流路；色譜柱作為“心臟”，內(nèi)部填充微米級固定相顆粒，提供巨大的比表面積以實現(xiàn)高分離效率；檢測器（如紫外-可見光檢測器UV-Vis、熒光檢測器等）則對流出組分進行實時響應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為電信號記錄。由于流動相組成固定，該方法操作簡便、重現(xiàn)性好，且無需復(fù)雜的梯度混合裝置，大大降低了運行成本和故障率。
一、開機前準備
提前將流動相完成0.45μm濾膜過濾，再進行超聲波脫氣15~20分鐘，徹d除去管路中的氣泡。
檢查色譜柱安裝方向與標識一致，確認管路連接無漏液，將泵頭的吸液過濾頭完q浸入流動相中。
確認儀器電源、數(shù)據(jù)工作站通訊鏈路正常，周邊無強振動、強電磁干擾源。
二、開機與系統(tǒng)初始化
依次打開高效液相色譜儀主機、輸液泵、檢測器的電源開關(guān)，啟動配套色譜工作站。
等待儀器自檢完成，在工作站中完成儀器連接，確認設(shè)備狀態(tài)顯示為“就緒”。
旋開泵的排氣閥，設(shè)置流速為5mL/min，點擊自動排氣功能，排氣5分鐘排盡管路殘留氣泡后，關(guān)閉排氣閥。
三、參數(shù)設(shè)置與系統(tǒng)平衡
在工作站中設(shè)置等度模式下的固定流動相配比，將流速逐步提升至方法設(shè)定值（常規(guī)反相柱多為1.0mL/min）。
設(shè)置檢測波長、柱溫箱溫度、系統(tǒng)最高保護壓力等參數(shù)，保存為專屬分析方法文件。
開啟檢測器燈源，待基線走平、壓力數(shù)值穩(wěn)定后，系統(tǒng)完成平衡，即可準備進樣。
四、進樣分析操作
將待測樣品經(jīng)0.22μm濾膜過濾后裝入進樣瓶，放入自動進樣器樣品盤對應(yīng)位置。
在工作站中設(shè)置樣品序列，錄入樣品名稱、進樣體積、數(shù)據(jù)保存路徑等信息。
點擊啟動采集，儀器自動完成進樣、數(shù)據(jù)采集，出峰完畢后自動停止采集，生成色譜圖。
五、分析后沖洗與關(guān)機
若使用了含鹽流動相，先用超純水-甲醇混合溶液沖洗系統(tǒng)20~30分鐘，徹d置換管路中的緩沖鹽。
切換為純甲醇沖洗色譜柱15~20分鐘，待基線平穩(wěn)后，將流速逐步降至0mL/min。
依次關(guān)閉檢測器燈源、輸液泵、儀器主機電源，退出工作站并關(guān)閉計算機，做好儀器使用登記。
